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    大鼠星型膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)——胰酶消化法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-12-05  點(diǎn)擊次數(shù): 1252次

    材料與儀器

    SD大鼠
    苯巴(匕匕)妥 解剖液 胰蛋白酶 Dnase DM培養(yǎng)液
    離心管 培養(yǎng)箱 手術(shù)器材

    步驟

    一、 取14.5d SD大鼠一只。

    二、 苯巴(匕匕)妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手術(shù)臺(tái)上,酒精棉球消毒皮膚,開腹取出子宮(約12-14個(gè)),放入解剖液中,剖開子宮,取出胚胎,放入解剖液中,在耳眼之間離斷,取頭側(cè)部組織,去除腦膜組織,取原始中腦區(qū)組織,放入離心管裝的解剖液中,待全部取出后,1500轉(zhuǎn)2分鐘。

    三、 用吸管吸出上清液,在組織細(xì)胞沉淀中加入胰蛋白酶一管(1 ml/vial),室溫30分鐘,1500轉(zhuǎn),離心5分鐘(離心前可加入解剖液以終止胰酶作用)。

    四、吸去上清,在組織細(xì)胞沉淀中加入Dnase 一管(2 ml/vial),37℃反應(yīng)10分鐘,1500轉(zhuǎn),離心5分鐘,吸去上清,在組織細(xì)胞沉淀中加入2 ml DM培養(yǎng)液吹打,計(jì)數(shù)(計(jì)數(shù)公式為(N1+N2+N3+N4)/4x104),以3x105個(gè)/瓶在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),做好標(biāo)記(時(shí)間、原代的還是第幾代傳代,姓名,細(xì)胞名稱等),放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。


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